产品目录

本制品是冷水鱼来源重组热敏感的尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），并经过多步纯化精制得到。与普通UDG相比，热敏UDG对温度更加敏感，室温下即可起作用，50℃以上即可失活。该酶能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基并释放游离尿嘧啶，常被用于消除PCR、qPCR、RT-qPCR扩增引起的气溶胶污染。

• 核酸内切酶活性：将1U热敏型UNG酶与200ng超螺旋质粒DNA在37℃下，共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
  
• 非特异性核酸酶活性：将1U热敏型UNG酶与15ng双链DNA片段在37℃温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。
  
• RNase活性：将1U热敏型UNG酶总RNA在37℃温育1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90%的RNA仍保持完整。
  
• 宿主DNA残留：使用大肠杆菌16S rDNA特异性引物探针组，采用荧光定量PCR法检测1U热敏型UNG酶，大肠杆菌宿主基因组DNA残留低于10 copies。
  
• 单链DNA酶活性：将1U热敏型UNG酶与1pmol单链寡核苷酸（FAM标记）在37℃孵育16h，经毛细管电泳检测，降解率<5%。

• 按下列体系配制PCR反应液
  

  成分	用量	终浓度
  10×PCR Buffer for Taq (Mg2+ Plus)	5μL	1×
  dUTP (10mM)	3μL	0.6mM
  dCTP/dGTP/dATP (10mM each)	1μL (each)	0.2mM
  Template DNA	X ng	-
  Primer 1 (10μM)	1μL	0.2μM
  Primer 2 (10μM)	1μL	0.2μM
  Taq DNA Polymerase (5U/μL)	0.5μL	0.05U/μL
  UNG酶(1U/μL)	1μL	0.02U/μL
  ddH2O	至50μL	-

  • 根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2～0.6mM之间调整。
    
  • 根据实验需要，50μL反应体系中，UNG酶使用量一般为0.1～1U。
• 反应程序
  

  步骤	温度	时间	循环数
  降解含U模板	25℃	10min	1
  UDG失活，模板预变性	95℃	3min	1
  变性	95℃	10 s	30～35
  退火	55～65℃	30 s
  延伸	72℃	30 s/kb
  终延伸	72℃	5min	1

  • 可根据实验需要调整PCR反应程序。